Ouchterlony

Ouchterlony

TP :
C’est l’immunodiffusion sur gel : les solutions déposées dans les puits creusés dans le gel diffusent de façon homogène dans toutes les directions autour du puits. Deux auréoles de diffusion peuvent donc entrer en contact lorsqu’elles ont suffisamment progressé. Cette zone de contact reste invisible s’il n’y a pas de réaction entre les deux solutions. Quand il y a réaction entre les solutions, il se forme un arc de précipitation visible à l’œil nu. Celui-ci est dû à l’interaction entre de nombreux anticorps et les antigènes spécifiques, entraînant la formation d’un complexe immun. NB : le temps de réaction avec les produits véritables est de l’ordre de 24h ; vous manipulez ici sur des produits de substitution mimant les réactions réelles mais permettant une lecture des résultats au bout de 15 min.

Objectifs :

• Pour montrer la spécificité de la réaction anticorps-antigène, on réalise un test d’Ouchterlony.
• Observer les arcs de précipitations

Manipulation proposée :

• Utiliser le gabarit de perçage pour creuser à l’aide du tube emporte pièce les puits nécessaires dans le gel d’Agar.
• Eliminer les disques de gélose avec le cure-dent si nécessaire
• Marquer sur la boîte de Pétri la disposition des produits à déposer dans les puits permettant de révéler la réaction de l’anticorps étudié avec les différents antigènes proposés.
• Remplir les différents puits avec 2 µL ou 2 gouttes : chaque produit devra être prélevé avec un compte goutte propre ou une micropipette à embout propre, puis être déposé dans les puits sans débordement ni bulles et sans endommager le gel d’agar.
• Fermer la boite
• Observer les résultats fournis sur fond noir et en éclairage rasant.

Résultats obtenus :
Arc de précipitation.