Préparation d'indicateurs colorés

12/09/2022 14:09

Biuret - Bleu de bromothymol B.B.T - Bleu coton

Bleu de méthylène - Bleu de thymol - Carmin aluné

Carmin acétique - Carmino-vert de Mirande - DNPH

Eau iodée ou lugol - Hélianthine - Liqueur de fehling

Noir ériochrome T - Orcéine acétique

Phénolphtaléine - Potassium chromate

Rouge de Méthyle - Rouge neutre - Safranine

Vert de Méthyle Pyronine - Violet de gentiane

Biuret (réactif) ou Gornall :

3 g de sulfate de cuivre (5H2O)
9 g de tartrate de sodium et de potassium
5 g d'iodure de potassium
1 L de soude à 0.2 mol/L

Dissoudre le sulfate et le tartrate dans 500 mL de la solution de soude. Ajouter l'iodure de potassium. Compléter à 1L avec la solution de soude.

Ce réactif prend une coloration violette en présence de liaison peptidique (jus de pois chiche, blanc d’œuf...)

ou 1 flacon de Cu2+ à 10% et 1 flacon de NaOH à 20%, les élèves utilisent les 2 flacons sur l'échantillon.

Bleu de bromothymol B.B.T 100 mL :

BBT : 0,4 g
alcool 95° : 20 mL
soude 0,1 mol/L : 7,4 mL
eau déminéralisée qsp 100mL

Indicateur de pH : Jaune - vert - bleu

Bleu coton 100mL :

1 g de bleu de méthylène + 3 mL d'acide éthanoïque glacial + qsp eau distillée 100mL.

Permet de colorer des organismes tel que les champignons.

= bleu de méthyle acétique

Bleu de méthylène 1 L :

0.1 g de bleu de méthylène dans 1000 mL d'eau déminéralisée, bien agiter.

Permet de colorer les noyaux des cellules. TP spectro

Nettoyage de la verrerie : alcool à bruler, acide citrique

Bleu de thymol :

0.4 g de bleu de thymol dans 1L d'éthanol.
Bleu de thymol (sans alcool) :

> 0.1 g de thymolsulfonéphtaléine
> 4.3 mL de Na OH 0.05 M
> eau distillée qsp 250 mL

Indicateur de pH : rouge (1) < pH < jaune (3) & jaune (8) < pH < bleu (10)

Carmin acétique :

Colorant de la chromatine et du noyau.
Mélanger 55 mL d’eau distillée et 45 mL d’acide acétique cristallisable, porter à ébullition, ajouter du carmin n°40 jusqu’à saturation (environ 5 g). Laisser refroidir et filtrer.

Carmin aluné :

Colorant de la cellulose.

Ajouter à 100 mL d'eau distillée, 4 g d’alun de potasse et 1 g de carmin, faire bouillir très doucement un quart d’heure environ, laisser refroidir et filtrer.

Attention la solution peut se contaminer : moisissures.

Carmin vert d'iode ou carmino-vert de Mirande :

Association du carmin aluné et du vert d’iode. Dissoudre 90g de carmin aluné dans 200 mL d’eau distillée, chauffer à feu doux pendant 40 minutes. Laisser reposer 24 heures ; ajouter 1 L d’eau distillée puis dissoudre 2 grammes de vert d’iode, porter à ébullition, laisser refroidir ; ajouter 10g d’acide phénique (phénol), faire bouillir à nouveau, laisser reposer 24 heures puis filtrer.

DNPH (dinitrophenylhydrazine):

Peser 0.4 g de DNPH et dissoudre dans 3 mL d' H₂SO₄ en agitant constamment. Puis ajouter 30 mL d'éthanol et enfin compléter à 100 mL avec de l’eau distillée, laisser reposer 24 heures et filtrer.

Réactif des aldéhydes et cétones

Eau iodée ou lugol (S.V.T) : flacon brun

Lugol : C(I₂) = 4.10^-2 mol/L. (avec la poudre : 1g d’iode avec 2g d’iodure de potassium. Diluer peu à peu avec de l’eau distillée et, après avoir versé dans une fiole jaugée, amener à 100 mL)

Pour des tests en cupule : diiode : 1.10^-3mol/L
Pour une coloration de préparation microscopique : diiode : 2.5.10^-2 mol/L

Hélianthine : (méthylorange)

Dissoudre 0,2 g de méthyl orange dans 1 L d’eau distillée chaude. Laisser refroidir et filtrer si besoin.

Liqueur de fehling : Flacon brun

500 mL de liqueur de fehling A
500 mL de liqueur de fehling B

une fois mélanger la solution ne se conserve pas longtemps!

Noir ériochrome T :

0.5 g de NET dans 100 mL de solution tampon 10

- Pour le dosage on met 4 à 6 gouttes

Phénolphtaléine (éviter son utilisation!) 100 mL :

0,1 g de phénolphtaléine
50 mL d'alcool
50 mL d'eau déminéralisée( solution hydroalcoolique)

-> A remplacer par le bleu de thymol.

Acide 8,2 – 12 Basique

Potassium chromate 1 L :

1 g de chromate de potassium dans 1L

Lors du TP, utiliser 10 mL de cet indicateur et non quelques gouttes car pour des raisons de toxicité, il a été dilué de façon plus importante (avant on l'utilisait à 50 g/L)

Rouge de Méthyle :

Dissoudre 0,2 g de rouge de Méthyle dans 600 ml d'éthanol et compléter à 1L avec de l'eau distillée.

Rouge violacé à pH<4,4 et jaune pâle à pH>6,2

Utilisé pour le TP séparation dans le cuivre : ici

Rouge neutre :

Dissoudre 0,1 g de rouge neutre dans 100 ml d'eau à PH 7 (eau de Volvic).

ne se conserve pas longtemps et doit donc être préparé peu de temps à l'avance.

De couleur rouge, il vire au jaune pour un PH > à 8 (colorant de la vacuole, s'utilise sur toutes les cellules végétales)

Safranine :

25 g de safranine
100 mL d'ethanol à 95°
800 mL d'oxalate d'ammonium à 25 g/L

Safranine = rouge coton

Vert de méthyle pyronine :

Je le commande prêt à l'emploie.

Le vert de méthyle colore l'ADN en vert mais il ne s'agit pas d'un colorant spécifique de l'ADN. Employé seul sur des cellules entières, il colore à peu près tout et en particulier la paroi pectocellulosique. Pour augmenter sa spécificité apparente, il faut l'utiliser avec un colorant complémentaire.

La pyronine colore les ARN en rose – rouge.

Le processus de coloration est détaillé dans ce TP

Violet de gentiane : (attention C.M.R)

2,5 g dans 1L d'eau

Le violet cristallisé ou violet de gentiane est utilisé dans la coloration de Gram pour la mise en évidence des bactéries à Gram positif et à Gram négatif. Le Violet de gentiane phéniqué forme un complexe avec le Liquide de Lugol qui colore les bactéries à Gram positif en violet.

Zones de virage en fonction du pH, de quelques indicateurs colorés :

Recette de quelques indicateurs colorés!

Préparation de colorants en chimie.