Orcéine acétique

Pour réaliser une coloration à l'orcéine acétique, il faut :

• - Prélever une jeune racine en croissance d'environ 1 cm sur un bulbe de jacinthe ou d'ail.
  
  - Couper le segment terminal à environ 0,5 cm de l'extrémité et le déposer sur une lame porte-objet. On doit observer une petite tâche jaune près de l'extrémité. C'est le méristème ou zone de croissance.
  
  - Recouvrir l'échantillon d'acide chlorhydrique à 1 mol/L (l'HCl détruit le ciment pectique qui relie les parois cellulaires, ce qui facilitera ensuite la dissociation des cellules).
  
  - Laisser agir 5 min. (ne pas dépasser ce temps).
  
  - Enlever ensuite l'acide avec un essuie-tout utilisé comme papier buvard en ayant soin de laisser en place l'échantillon végétal.
  
  - Recouvrir l'échantillon d'une solution d'orcéine acétique et laisser agir pendant 15 min. (l'orcéine colore principalement les chromosomes et facilite donc leur repérage).
  
  - Eliminer le colorant avec un essuie-tout en faisant attention de ne pas entraîner l'échantillon.
  
  - Recouvrir d'une goutte d'acide acétique à 45 % et poser une lamelle couvre objet.
  
  - Appuyer doucement sur la lamelle pour aplatir l'échantillon ce qui entraîne la dissociation des cellules.


 

Observer au microscope en commençant par le faible grossissement. Placer au centre du champ de vision une zone où sont visibles des chromosomes (en déplaçant la lame). Passer au grossissement supérieur.

Source : Jeulin