TP Term EDS : Diagnostiquer le syndrome de Cushing par un test ELISA

Plus on aura d’anticorps dans l’échantillon à tester, plus la couleur après l’ajout de l’enzyme sera jaune (du + concentré au – concentré : jaune>vert>violet)

Matériel élèves :

• Barrette de puits pour ELISA avec gélose avec un repère visuel

  • 1 g d’agar pour 100 mL d’eau distillée

  • Mettre 2 gouttes dans chaque puits

  • conserver au frais dans du papier film

     

• 1 T. à Hémolyse avec solution de choux rouge noté Enzyme

  • Couper en petits morceaux quelques feuilles de choux rouge

  • Faire bouillir 30 min

  • Filtrer

  • Conservation dans flacon brun au frigo environ 1 semaine

   

• 8 T. à hémolyses avec les solutions ci-dessous :

  Préparation pour 20 ml de solution dans un bécher, puis distribuer dans les tubes

  (l'élève prélèvera 2 gttes)

•  

   

• Pipettes plastiques dans un pot en verre

• Portoir

• Marqueur

• Papier absorbant

• Chronomètres

• Feuille de dépôt :

C1

C2

C3

C4

S1

S2

Témoin

Fiche technique ELISA adaptée au TP avec les produits de substitution : 

- Préparation des barrettes de puits pour Elisa (environ 40 barrettes) :

•  1 g d'agar pour 100 ml d'eau distillée, faire bouillir
•  Maintenir au chaud sur la plaque et introduire 2 gouttes dans chaque puits. Utiliser un compte goutte 1mL, poser la barrette sur la paillasse, ne pas toucher le puit avec la pipette. Faire attention que tous les puits aient la même quantité de gélose et pas de bulles. (utiliser un cure dent pour mélanger si des bulles sont présentes)

- Flacon avec solution de chou rouge :

• Couper en petits morceaux quelques feuilles de choux rouge (5 à 6),
• Faire bouillir 30 min,
• Filtrer et laisser refroidir,
• Conservation dans flacon brun au frigo environ 1 semaine.