TP 1ère EDS SVT : Recherche des processus de la synthèse des protéines (sujet type ECE)

Matériel élèves :

• Microscope
• Lames + lamelles
• Cuvette
• Scalpel
• ciseaux
• Coupelle en verre
• Pince  fine
• Caméra

Matériel prof :

• 1 oignon blanc
• Vert de Méthyle – Pyronine
• Couteau

Nous disposons d’un colorant : le vert de méthyle Pyronine, il permet d’effectuer une double coloration : il colore l’ADN en vert et l’ARNm en rose.

Coloration au vert de méthyle pyronine

• Préparer 2 verres de montre l’un avec 2 à 3 gouttes de colorant, l’autre rempli à moitié d’eau.
• Prélever un petit fragment d’épiderme d’écaille d’oignon (sur la partie concave de l’écaille), maximum 0.5 cm x 0.5 cm
• Déposer le fragment durant 10 à 15 minutes dans le colorant.
• Déposer ensuite le fragment 2 minutes dans beaucoup d'eau.
• Monter le fragment entre lame et lamelle dans une goutte d’eau
• Observer au microscope 

Source : ac-versaille et ici

Pour obtenir de bons résultats avec cette coloration, il est nécessaire de fixer les cellules préalablement avec un fixateur pendant une quinzaine d'heures. Il faut éviter les fixateurs comme le liquide de Bouin contenant de l'acide picrique qui dépolymérise l'ADN. On peut utiliser par exemple la formule de Carnoy : alcool absolu 30 mL ; acide acétique : 10 mL.

source : forum svt